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考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么
在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致da吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，da光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有da光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，xaio可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
鉴别试验
（1）本品的水溶液（1+2000），显蓝色。
（2）取本品的水溶液（1+1000）5ml，加盐酸1ml时，变为暗黄绿色。
（3）本品的硫酸溶液（1+100）显暗橙色，取此液2-3滴加水5ml时，显绿色。
（4）本品的水溶液（1+1000）5ml，加（1+5）5ml，在水浴中加热时变为紫红色。
（5）取本品0.1g,加铵溶液（3+2000）200ml 溶解，取此溶液1ml，加铵溶液（3+2000）配至100ml的溶液，在波长628-632nm处有吸收带。
纯度试验
（1）水不容物 小于0.20%。
（2）氯化物、硫酸盐 以总量计，小于4.0%。
（3）重金属 以Pb计，小于20ug/g。
（4 以As2O3计，小于4.0ug/g。
使用量：一般为0.025g/kg。
.使用方法：将准确称量的本品置于容器中，逐渐加入适量温水，并不断搅拌使之完全溶解，所得溶液即可用于着色。
使用过程中应注意避免或减少酸、减、氧化计、还原计、金属离子、微生物等物质的不良影响，并注意免受高温与暴晒，以防褪色或变色。
复合着色剂的使用：根据需要，可将本品与本公司生产的其它色泽的着色剂按适当比例配置各种不同的颜色。
