大肠实验步骤(—)培养基1、普通乳糖蛋白胨培养液亚硫酸钠培养基（供平板分离用）蛋白胨 10g， 乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，琼脂 15～20g，蒸馏水1000mL，无水亚硫酸钠 5g，5％的碱性品红乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。4、培养基（EMB培养基）（供发酵法平板分离用，3和4可任选一种）蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，2％伊红（曙红）水溶液 20mL，5％美蓝（亚甲蓝）水溶液13mL，pH 7.2~7.4。(二)灭菌移液管、灭菌稀释水、试管、杜汉氏小管、革兰氏染色液、灭菌培养皿。(一)水样的采集供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4h ，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。1、自来水取样：应在水打开放水5min ，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。采样后，瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。
粪大肠菌群快速检测 （酶底物法）
1.适用范围
本方法适用于生活饮用水及其水源水、地表水、污水、废水等水中粪大肠菌群（耐热大肠菌群）的定性检测、定量检测
2.方法原理
固定底物酶底物法（DST）采用大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄色的原理，来判断水样中是否含粪大肠菌群（耐热大肠菌群），粪大肠的培养温度是44.5℃。
3.仪器设备
3.1 程控定量封口机
3.2电热恒温培养箱
3.3 冰箱
3.4 51孔定量盘、97孔定量盘
3.5 100ml无菌水样瓶
3.6 高压蒸汽灭菌锅
3.7 干热灭菌器
3.8 量筒
3.9 吸管
3.10 试管
培养基和试剂1 （固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基2 无菌水样品的采集和保存1采样前准备：1.1 采样瓶：灭菌100毫升消毒带刻度容器。2 样品采样及注意事项2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样时，均要小心开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染，并注意在使用船只或附带的采样绳等附加设备采样时可能造成的污染。2.2 在采集江、河、湖、库、地表水样时，可握住瓶子底部直接将采样瓶插入水中，约距水面10~15厘米处，瓶口朝来水方向，使水样灌入瓶内。如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直至充满水样为止。采好样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。采样后，采样瓶内上部应留有一些空隙，以便检验前充分混匀水样。2.3 用采样器采样时，将无菌的水样瓶放入架内。将采样装置放入水中。到达预定深度后，打开瓶塞，待水样灌好后，松开瓶塞的软绳，盖上瓶盖。再将整个装置提出水面。2.4 从自来水采集样品时，不要选用漏水的，采水前可先将水用酒精灯火焰灼烧灭菌或用70%的酒精溶液消毒水及采样瓶口，然后将水完全打开，放水数分钟后除去水管中的滞留杂质。采水时控制水流速度小心接入瓶内。2.5在同一采样点进行分层采样时，应自上向下进行，以免不同层次的搅扰；2.6采样完毕，应将采样瓶编号、作好采样记录。将记录下采样条件，填入采样表格内。2.7 样品的运输和保存采好的水样，应迅速运往实验室，进行细菌学检验，一般从取样到检验不宜超过2小时，不然应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6小时，实验室接到送检样后，应将样品立即放入冰箱，并在2小时内着手检验。3 样品交接样品运回实验室后，由采样人员与质管科样品管理人员进行交接。4干扰与消除：防止操作过程中的污染，严格无菌操作。
